love爱博体育官网,官网,官方网站,官方网址

    <meter id="9nzdl"><strike id="9nzdl"><em id="9nzdl"></em></strike></meter>

              <pre id="9nzdl"><video id="9nzdl"></video></pre>

                   
                   
                  产品搜索  
                  产品目录  
                  奥林巴斯显微镜
                  进口MMM实验箱子
                  奥林巴斯显微镜成像系统
                  尼康显微镜
                  徕卡显微镜
                  蔡司显微镜
                  澳浦显微镜
                  同舟同德显微镜
                  生物显微镜
                  体视显微镜
                  耶拿成像系统显微镜专用
                  实验室常规仪器
                  徕卡切片机
                  显微镜之家
                  显微镜配件
                  联系我们  
                  公司名称:北京荣兴光恒科技有限公司
                  地址:北京市海淀区建材城西路50号2号楼三层3131室
                  邮编:100096
                  电话:86-010-89737332
                  手机: 13811719035
                  联系人: 李小兵
                  传真:
                  网址:www.cjttn.tw
                  E-mail: 13811719035@163.com
                  技术文章
                  徕卡DM3000荧光显微镜用于荧光原位杂交(FISH)介绍
                  点击次数:411 发布时间:2018-06-21

                  徕卡DM3000荧光显微镜用于荧光原位杂交(FISH)介绍

                  徕卡DM3000荧光显微镜用于荧光原位杂交(FISH)介绍

                  技术:

                  1、荧光原位杂交原理

                  FISH(fluorescence in situ hybridization)技术是一种重要的非放射性原位杂交技术。它的基本原理是:如果被检测的染色体或DNA纤维切片上的靶DNA与所用的核酸探针是同源互补的,二者经变性-退火-复性,即可形成靶DNA与核酸探针的杂交体。将核酸探针的某一种核苷酸标记上报告分子如生物素、,可利用该报告分子与荧光素标记的特异亲和素之间的免疫化学反应,经荧光检测体系在镜下对待测DNA进行定性、定量或相对定位分析。

                  2、荧光原位杂交特点

                  原位杂交的探针按标记分子类型分为放射性标记和非放射性标记。用同位素标记的放射性探针优势在于对制备样品的要求不高,可以通过延长曝光时间加强信号强度,故较灵敏。缺点是探针不稳定、自显影时间长、放射线的散射使得空间分辨率不高、及同位素操作较繁琐等。采用荧光标记系统则可克服这些不足,这就是FISH技术。FISH技术作为非放射性检测体系,有以下特点。

                  荧光原位杂交优点:1、荧光试剂和探针经济、安全;2、探针稳定,一次标记后可在两年内使用;3、实验周期短、能迅速得到结果、特异性好、定位准确;4、FISH可定位长度在1kb的DNA序列,其灵敏度与放射性探针相当;5、多色FISH通过在同一个核中显示不同的颜色可同时检测多种序列;6、既可以在玻片上显示中期染色体数量或结构的变化,也可以在悬液中显示间期染色体DNA的结构。

                  荧光原位杂交缺点:不能达到100%杂交,特别是在应用较短的cDNA探针时效率明显下降。

                  3、荧光原位杂交实验流程

                  FISH样本的制备→探针的制备→探针标记→杂交→(染色体显带)→荧光显微镜检测→结果分析。

                  4、荧光原位杂交应用

                  荧光原位杂交技术不但可用于已知基因或序列的染色体定位,而且也可用于未克隆基因或遗传标记及染色体畸变的研究。在基因定性、定量、整合、表达等方面的研究中颇具优势。

                  荧光原位杂交技术初用于中期染色体。从正在分化的细胞核中制备的这种染色体是高度凝缩的,每条染色体都具有可识别的形态,它们染色后将显现出特征性的着丝粒位置及染色带型。在处理中期染色体时,通过测定FISH所获得荧光信号相对于染色体短臂末端的位置(FLpter值)来进行作图。使用中期染色体的不足之处在于,由于它的高度凝缩的性质,只能进行低分辨率作图,两个标记至少分隔1Mb才能作为分开的杂交信号被分辨出来(Trask et al.,1991)。这种分辨率不足以构建有交往的染色体图谱。故此中期染色体FISH主要用于确定新标记在染色体上的大概位置,为其他更精细的作图方法做准备。 一直以来,这些“其他方法”并不包括任一种FISH,但1995年后,一系列高分辨率的FISH技术已发展起来。这些技术通过改变待研究的染色体制备的性质而达到较高的分辨率。中期染色体对于精细作图来说凝缩度太高,因而我们需要选用较为伸展的染色体。有两种途径可以满足这一要求(Heiskanen et al.,1996): 机械伸展的染色体(mechanically stretched chromosome)通过改变从中期细胞核中分享染色体的方法而获得。离心产生剪切力可将染色体伸展到正常长度20倍。每条染色体仍可识别,而FISH信号作图方法与通常处理的中期染色体相同,这样,分辨率可明显提高,能够区分出相隔200~300kb的标记。 非中期染色体(non-metaphase chromosome)染色体仅在中期高度凝缩,而在细胞周期的其他阶段保持天然未包装状态,有研究者曾利用前期细胞核,此时染色体凝缩程度足以区分出单个染色体。实际应用中,这种方法并无优于机械伸展的染色体之处。相比之下分裂间期(interphase)的染色体更为有用,因为分裂间期(再次细胞核分裂之间)的染色体包装程度低。使用分裂间期的染色体,分辨率有可能达到25kb以下,但染色体形态特征消失,推动了定位探针位置所需的外部参照点。因此,该技术可在已获得染色体粗略图谱后使用,通常作为确定染色体一段小区域内一系列标记物顺序的方法。 间期染色体含有去组装的全部的细胞DNA分子。为了进一步提高FISH的分辨率到25kb以下,有必要放弃完整的染色体,而使用纯化的DNA。这种方法叫做纤维-FISH(fiber-FISH),利用凝胶拉伸或分子梳理技术制备DNA,可以分辨间距小于10kb的标记。

                   

                  北京荣兴光恒科技有限公司 版权所有 总访问量:149674 地址:北京市海淀区建材城西路50号2号楼三层3131室 邮编:100096
                  电话:86-010-89737332 传真: 手机:13811719035 联系人:李小兵 邮箱:13811719035@163.com
                  GoogleSitemap 网址:www.cjttn.tw 技术支持:中国化工仪器网 管理登陆 ICP备案号:京ICP备18064275号-1
                  网站关键词:奥林巴斯CX31/41/BX43/53显微镜,尼康显微镜,徕卡显微镜,国产显微镜热线电话:13811719035
                  电话:
                  86-010-89737332
                  传真:

                  手机:
                  13811719035

                  中国化工仪器网

                  中级会员

                  中级会员

                  8

                  推荐收藏该企业网站

                  Sitemap

                  六合宝典高手论坛| 双色球最准确预测100%| OPE体育|